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试管婴儿:男性X、Y精子分离术

发布时间:2019-03-08 点击量:
流式细胞术分离法
利用X精子和Y精子中DNA含量的差异来分离精子,X精子和Y精子DNA含量的差异为3%~5%,X染色体比Y染色体大,人类X染色体有超过1000个基因,而Y染色体不到200个,分离准确率可以达到90%。这种技术在多国已经被商业化并且运用到动物(如牛)的生产中,分离好精子被冷冻保存,并在全球销售。 改良上游分离法
其原理是Y精子在培养液中比X精子游动快,其密度也比X精子低。所以Y精子最先到达培养液中,并在培养液中停留的时间比X精子长,故在培养液中可以获得高比例的Y精子。有研究报道,使用改良上游法获得的精子行IVF,男婴出生率为90.9%,行人工授精男婴出生率88.5 %。
白蛋白分离法
该方法是精子通过人血清白蛋白柱时,Y精子比X精子游得快,穿透粘稠的白蛋白溶液的能力更强.从而来分离X、Y精子。采用自蛋白柱分离法获取Y精子含量可达85%,用该法获得的精子行人工授精,男婴出生率为79%。
电泳分离法
其原理是正常人精子膜表面含有大量唾液酸使精子带有负电荷,其中X和Y精子表面的负电荷含量不等,这样在电场作用下可将X和Y精子分离。
密度梯度离心分离法
原理是利用X、Y精子在分离介质中的沉降速度的差异,X精子沉降速度比Y精子快;这样在一个由低到高的密度梯度中,通过适当的离心力和离心时间,可在不同密度梯度中分离出富含X或Y精子。
分离方法常用Percoll作为主要材料来制备不同密度的梯度液,可以制作8层甚至12层Percoll梯度离心液。在精液层与Percoll层交界处收集的精子中Y精子为可达73%,而在沉淀层中Y精子要低的多,仅为27%。相对于分离Y精子,该方法更适合X精子的分离。采用8层梯度离心法在沉淀中获得82%纯度的X精子,而采用12层梯度离心法可获得94%纯度的X精子。
干涉显微镜分离法
其原理是在干涉显微镜下可以看到单个精子的体积大小不一。如牛携带X染色体的精子比携带Y染色体的精子大约大1%。这种技术可以实现自动化,可以高通量分离精子。这种方法的优点是不用DNA结合染料,缺点是分离出的X精子和Y精子的纯度稍低,在80%以下,甚至更低。
Sephadex G50滤过分离法
基于X精子头部长,其宽径亦明显大于Y精子,故采用Sephadex G50滤过时,由于分子筛作用,最后可获得富含X精子的标本。该法可获得95%纯度的X精子,同时因Sephadex GSO也可将不活动的精子滞留在柱中,从而对不活动的精子也进行了分离。
免疫磁珠分离法
利用免疫学方法分离精子,通过分离X、Y精子表面差异膜蛋白(如H-Y抗原)后,通过抗原抗体反应到达分离某一类精子的目的。通过H-Y抗原免疫磁珠分离的X精子纯度可达98%。
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